> Blog > Vijesti iz industrije

Koje su funkcije ELISA kompleta?

2022-12-23

ELISA kit temelji se na čvrstoj fazi antigena ili antitijela i enzimskom označavanju antigena ili antitijela. Antigen ili protutijelo vezano na površinu krutog nosača i dalje zadržava svoju imunološku aktivnost, a enzimom označeni antigen ili protutijelo zadržava i svoju imunološku aktivnost i aktivnost enzima. U trenutku određivanja, uzorak koji se testira (u kojem se mjeri antitijelo ili antigen) reagira s antigenom ili antitijelom na površini čvrstog nosača. Kompleks antigen-protutijelo formiran na čvrstom nosaču odvaja se od ostalih tvari u tekućini pranjem.

Dodaju se antigeni ili protutijela obilježeni enzimima, koji se također reakcijom vežu na čvrsti nosač. U ovom trenutku, količina enzima u čvrstoj fazi je proporcionalna količini tvari u uzorku. Nakon dodavanja supstrata enzimske reakcije, supstrat katalizira enzim da postane obojeni produkt. Količina proizvoda izravno je povezana s količinom ispitivane tvari u uzorku, pa se prema dubini boje može provesti kvalitativna ili kvantitativna analiza.

Visoka katalitička učinkovitost enzima neizravno pojačava rezultate imunološkog odgovora, čineći analizu vrlo osjetljivom. ELISA se može koristiti za određivanje antigena, ali također i za određivanje antitijela.

Osnovni principi ELISA kita
Koristi specifičnu reakciju antigena i antitijela za povezivanje objekta s enzimom, a zatim proizvodi reakciju boje između enzima i supstrata za kvantitativno određivanje. Objekt mjerenja može biti antitijelo ili antigen.

Za ovu metodu određivanja potrebna su tri reagensa:
â Antigen ili antitijelo čvrste faze (imuni adsorbent)
â¡ Antigen ili antitijelo označeno enzimima (marker)
â¢ supstrat za djelovanje enzima (sredstvo za razvijanje boje)

U mjerenju se prvo antigen (antitijelo) veže na čvrsti nosač, ali i dalje zadržava svoju imunološku aktivnost, a zatim se dodaje konjugat (marker) antitijela (antigena) i enzima koji još uvijek zadržava svoju izvornu imunološku aktivnost i enzim aktivnost. Kada konjugat reagira s antigenom (protutijelom) na čvrstom nosaču, dodaje se odgovarajući supstrat enzima. To jest, katalitička hidroliza ili REDOX reakcija i boja.

Nijansa boje koju proizvodi proporcionalna je količini antigena (antitijela) koja se mjeri. Ovaj obojeni proizvod može se promatrati golim okom, optičkim mikroskopom, elektronskim mikroskopom, također se može mjeriti spektrofotometrom (instrument za označavanje enzima). Metoda je jednostavna, praktična, brza i specifična.

Prethodno:Predstavljanje Elisa Plate

Sljedeći:Zašto stanična kultura najprije lizira crvena krvna zrnca?